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谷氨酸合成酶(GOGAT)活性檢測(cè)試劑盒

粗酶液提?。杭?xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟： 1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測(cè)定（1）在試劑二中加入 18mL 試劑一充分溶解混勻，置于 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 5min；現(xiàn)配現(xiàn)用；（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL樣本和180μL試劑二，混勻，立即記錄340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2，計(jì)算 ΔA=A1-A2。

GOGAT 活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(V 樣×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.642×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(V 樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=643×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：?jiǎn)挝坏亩x：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GOGAT（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=1.286×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d： 96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.02 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

谷氨酸合成酶(GOGAT)活性檢測(cè)試劑盒

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146
《Ammonium Nitrogen Tolerant Chlorella Strain Screening and Its Damaging Effects on Photosynthesis》 作者:Jie Wang, Wei Zhou,Hui Chen,Jiao Zhan, Chenliu He,and Qiang Wang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:30666245
《Altered gut microbiota and mucosal immunity in patients with schizophrenia.》 作者:Ruihuan Xua,Bingbing Wu,Jingwen Liang,Fusheng He,Wen Gu,Kang Li,Yi Luo,Jianxia Chen,Yongbo Gao,Ze Wu,Yongqiang Wang,Wenhao Zhou,Mingbang Wang 期刊:Brain Behav. Immun. 影響因子:6.17 PMID:31255682
 

北京索萊寶科技有限公司是一家從事生物學(xué)試劑及試劑盒的高科技生物企業(yè)。

總部位于北京，并在全國設(shè)有經(jīng)銷或代理機(jī)構(gòu)。產(chǎn)品因可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和較為完善的售后服務(wù)確立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客戶為中心、以產(chǎn)品為保障、以誠信為基礎(chǔ)、以創(chuàng)新為宗旨”的發(fā)展理念，擁有專業(yè)的研發(fā)和質(zhì)量檢測(cè)團(tuán)隊(duì)以及的倉儲(chǔ)和物流系統(tǒng)。“Solarbio”已經(jīng)得到全國科研工作者的認(rèn)可，成為廣大經(jīng)銷商推崇的。

公司擁有一批專業(yè)的研發(fā)人員，我們專注于生物產(chǎn)品的不斷完善和創(chuàng)新。產(chǎn)品覆蓋面廣，品質(zhì)可靠。先后開發(fā)了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的多種試劑及試劑盒。同時(shí)，索萊寶公司提供各種常規(guī)生化試劑，庫存常備產(chǎn)品多達(dá)10000多種，可隨時(shí)為廣大科研工作者提供各類專業(yè)試劑。在質(zhì)量方面，索萊寶謹(jǐn)記公司信念：質(zhì)量高于一切。所有研發(fā)的產(chǎn)品都設(shè)有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)纳a(chǎn)流程，科學(xué)的質(zhì)量檢測(cè)方法和成熟的質(zhì)量檢測(cè)程序，我們恪守對(duì)每一位用戶的承諾：用專業(yè)的態(tài)度做專業(yè)的品牌。同時(shí)，公司組建了一支專業(yè)的技術(shù)服務(wù)隊(duì)伍，能夠?yàn)榭蒲泄ぷ髡咛峁I(yè)的技術(shù)服務(wù)。每一位購買索萊寶產(chǎn)品的用戶都能夠得到專業(yè)的咨詢和完善的售后服務(wù)。

索萊寶公司堅(jiān)持與接軌，注重和企業(yè)的合作與交流，并提供產(chǎn)品代理、市場(chǎng)咨詢等多項(xiàng)服務(wù)。公司將一如既往與世界更多合作，不斷為廣大生物科研工作者提供更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)。公司理念：“為科研服務(wù)，為生命盡責(zé)”。一個(gè)人能夠走多遠(yuǎn)，取決于與誰同行。索萊寶公司期待與各同行精誠合作。

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