產品名稱:蛋白質提取試劑核蛋白抽提試劑盒
產品型號:R0050
產品特點:蛋白質提取試劑核蛋白抽提試劑盒貨號:R0050規(guī)格:50T/100T本試劑盒提供了一種簡單、方便的從培養(yǎng)細胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個過程只需約 60 分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細胞中分離出來。
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蛋白質提取試劑核蛋白抽提試劑盒
貨號 :R0050
規(guī)格 :50T/100T
產品內容 :
試劑盒組成 | 50T | 100T |
漿蛋白抽提試劑 | 25ml | 50ml |
核蛋白抽提試劑 | 5ml | 10ml |
PMSF | 300ul | 1ml |
保存 :核/漿蛋白抽提試劑 4℃保存,PMSF 于-20 ℃保存。
產品簡介:
本試劑盒提供了一種簡單、方便的從培養(yǎng)細胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個過程只需約 60 分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細胞中分離出來。 得到的蛋白可以用于 Western blot 等實驗。 本試劑盒通過漿蛋白抽提試劑使細胞膨脹破裂,釋放出胞漿蛋白,再通過離心得到細胞核。然后通過核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白。本試劑盒可以抽提 50/100 個樣品(每個樣品約 2×10 6 個 Hela 細胞,40mg)。
操作方法 :
裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。
一 、 對于體外培養(yǎng)細胞 :
1.根據用量取適當?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入 PMSF,使 PMSF 的終濃度為 1mM。PMSF需現(xiàn)用現(xiàn)加,若目標蛋白含有豐富的半胱氨酸,可以在兩種蛋白抽提液中加入 DTT 終濃度 0.5mM。
2.對于貼壁細胞,去除培養(yǎng)液,用 PBS 洗一遍,用細胞刮刀收集細胞,或用 EDTA 消化后吹打下細胞(好不用胰酶硝化,以免胰酶消化目的蛋白) 。500 g 離心 2~3 分鐘收集細胞,吸盡上清留下沉淀備用。
3.對于懸浮細胞:用 PBS 洗一遍,500 g 離心 2~3 分鐘收集細胞,吸盡上清,留下細胞沉淀備用。
4.每 20ul 細胞沉淀加入 200ul 漿蛋白抽提試劑(2×10 6 個細胞沉淀約 20ul 或 40mg) 。
5.用移液器吹打或高速渦旋 15 秒(可適當延長) ,必須使細胞沉淀*分散開成單細胞懸液。細胞沉淀分散不*會導致蛋白產量降低。
6.冰浴 10 分鐘。
7.高轉速劇烈渦旋 10 秒,4℃ 12000~16000g 離心 10 分鐘。
8.上清即為抽提得到的細胞漿蛋白,立即吸取上清預冷的樣品管中備用,進行后續(xù)的 PAGE、Western 等實驗,但蛋白濃度較低,可根據需要進行相應濃縮。
9.沉淀即為細胞核,要*吸盡殘余的上清(避免細胞漿蛋白的污染) ,加入 50-100ul 核蛋白抽提試劑。
10.用移液器吹打或高速渦旋 15 秒(可適當延長)沉淀*散開,冰浴 10 分鐘。
11.高轉速劇烈渦旋 10 秒,4℃12000~16000g 離心 10 分鐘。
12.立即吸取上清預冷的樣品管中,此即為抽提得到的細胞核蛋白??蛇M行后續(xù)實驗或-70℃凍存。
對于組織樣品:
把組織稱重后,盡可能切成非常細小的碎片,按每 50mg 組織加入 200ul-500ul PBS,用勻漿器冰上勻漿制成細胞懸液,500 g 離心 2~3 分鐘收集細胞,吸盡上清,收集沉淀。加入 200ul 漿蛋白抽提試劑后接上述步驟 5。
注意事項 :
1.裂解得到的蛋白樣品,由于含有較高濃度的去垢劑干擾,不能用 Bradford 法測定蛋白濃度,可以選用本公司生產的 BCA 蛋白定量試劑盒(貨號 PC0020)測定蛋白濃度。
2.對于組織樣品,本試劑盒適用于新鮮組織,對凍存組織抽提效果較差。
3.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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參考文獻:
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《Lactobacillus plantarum NA136 improves the non-alcoholic fatty liver disease by modulating the AMPK/Nrf2 pathway》 作者:Zijian Zhao,Chao Wang ,Li Zhang,Yujuan Zhao,Cuicui Duan,Xue Zhang,Lei Gao,Shengyu Li 期刊:Applied microbial and cell physiology 影響因子:3.67 PMID:31115630
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影響因子:3.361 PMID:30502652
《l-Proline Alleviates Kidney Injury Caused by AFB1 and AFM1 through Regulating Excessive Apoptosis of Kidney Cells》 作者:Huiying Li , Songli Li, Huaigu Yang ,Yizhen Wang , Jiaqi Wang , and Nan Zheng 期刊:Toxins 影響因子:3.895 PMID:30995739
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