產品名稱:PCR試劑 2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)
產品型號:PC1350
產品特點:PCR試劑 2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)貨號:PC1350 規(guī)格 :500U/1000U濃度 :5U/ul保存 :-20℃保存, 有效期少一年。
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PCR試劑 2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)
貨號:PC1350
規(guī)格 :500U/1000U
濃度 :5U/ul
保存 :-20℃保存, 有效期少一年。
產品簡介 :
Pfu DNA Ploymerase 是從克隆有 Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大腸桿菌中表達并經過柱純化分離出來的重組蛋白,其分子量為 90kD。由于 Pfu 酶具有 3’→5’核酸外切酶活性,它能糾正 DNA 擴增過程中產生的錯配,而傳統(tǒng)的 Taq 酶卻不能,其它耐熱 DNA Polymerase 如 Vent、Deep Vent、Tli、UITma 等雖具有校正功能, 但 Pfu 酶是目前已發(fā)現的所有耐熱 DNA Polymerase 中出錯率低的。 Pfu 酶無 5’→3’核酸外切酶活性,PCR 反應中的延伸速度一般為 0.5-1kb/min,比 Taq 酶要低。Pfu 酶比 Taq 酶熱穩(wěn)定性更好,95 1 ℃ 小時仍保持90%以上的活性,對于 GC 含量很高的模板,變性溫度可以提高到 98℃而不影響其活性。Pfu 酶的 PCR 產物為平末端,可加 A 處理再與 T-載體連接或使用平末端克隆載體。
活性定義 :
1 單位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定義為在 74℃,30 分鐘內,以活性化的大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物,將 10 nmol 脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質所需的酶量。
質量控制 :
SDS-PAGE 檢測 Pfu DNA Polymerase 純度大于 99%; 經檢測無外源核酸酶活性; PCR 方法檢測無宿主殘余DNA;能有效地擴增人類基因組中的單拷貝基因;室溫存放一周,無明顯活性改變。
酶貯存緩沖液 :
50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol;其他成份。
適用范圍 :
用于 DNA 的高保真擴增,如基因表達克隆、基因定點突變、細胞內基因點突變的分析(SNP)和末端補平等。
建議 PCR 體系(以 50µl 反應體系為例)
Template <0.5µg
上游引物(10µM) 1µl
下游引物(10µM) 1µl
10×Buffer(含 Mg 2+ ) 5µl
dNTP(各 2.5mM) 4µl
Pfu DNA Polymerase 0.5-1µl
ddH2O up to 50µl
注意事項 :
1、PCR 反應體系加樣時,后一步加入 Pfu DNA Ploymerase,整個過程宜在冰上操作。
2、取 Pfu DNA Ploymerase 做 PCR 反應時,請用高壓滅菌處理過的吸頭。
3、10×Pfu Buffer 中含 20 mM Mg 2+ ,如 PCR 反應需要較高 Mg 2+ 濃度,請另行加入。
4、 用Pfu酶擴增時, 引物的純度要求較高, 引物長度大于18個堿基, Tm值在55-80℃之間, 引物濃度在0.1-0.5uM之間,比 Taq 酶略高。
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