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魚(yú)全血單核細(xì)胞分離液試劑盒
貨號(hào)：P5330
規(guī)格：2×200ml/KIT
保存 ：室溫避光儲(chǔ)存，有效期少 2 年。

魚(yú)全血單核細(xì)胞分離液試劑盒

本品用于分離魚(yú)全血單核細(xì)胞。

本品易感染細(xì)菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液（當(dāng)稀釋后血液體積小于3mL時(shí)，加入3mL分離液；大于等于3mL，加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時(shí)間較長(zhǎng)，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常現(xiàn)象。）

3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速不超過(guò)1200g）。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為單個(gè)核細(xì)胞層，離心管底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞。

5. 小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中， 10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞。250g，離心10min。

6. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心10min。分離前 分離后水平離心 血漿層單個(gè)核細(xì)胞層紅細(xì)胞層分離液層

7. 重復(fù)步驟6

8. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。

注意事項(xiàng)：

A. 開(kāi)封前顛倒混勻，本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品，為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封，避免微生物污染。

B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。

C. 血液樣本為新鮮抗凝血（采血2 h以?xún)?nèi)），為保持單個(gè)核細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏。

D. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。

E. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁影響分離效果。

F. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(huì)影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸索jia的分離條件。

G. 吸取過(guò)多的單個(gè)核細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加；吸取過(guò)多的血漿層可能會(huì)導(dǎo)致單個(gè)核細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染。

H. 如果要進(jìn)一步對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過(guò)程中，注意無(wú)菌操作，避免微生物污染。

I. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶(hù)在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱(chēng)。