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牛脾臟淋巴細(xì)胞分離液試劑盒
貨號(hào) ：P6240
規(guī)格 ：200ml
保存 ：室溫避光儲(chǔ)存，有效期少 2 年。

試劑盒內(nèi)容 ：

全血及組織稀釋液 200ml
細(xì)胞洗滌液 200ml
試劑C 200ml
試劑F 200ml
說(shuō)明書 1 份

脾臟組織單細(xì)胞懸液的制備方法
注 ：A ．全過(guò)程及所需試劑要求無(wú)菌環(huán)境 。
B ．本試劑盒中不包含膠原酶，若采用酶消化法制備單細(xì)胞懸液 ， 請(qǐng)客戶根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室要求另購(gòu)不同類型膠原酶 。
     1. 剪碎法：將組織塊放入平皿后，加入少量F液及20%胎牛血清；用眼科剪將組織剪勻漿狀，加入5mlF液及20%胎牛血清；用吸管吸取組織勻漿，用100目不銹鋼濾網(wǎng)(另購(gòu))過(guò)濾到試管內(nèi)；離心沉淀1500轉(zhuǎn)/分×3min，再用細(xì)胞洗滌液清洗3次，每次以500rpm短時(shí)低速離心除去細(xì)胞碎片，以200目不銹鋼濾網(wǎng)（另購(gòu)）過(guò)濾去細(xì)胞團(tuán)塊。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為（2～5）×10 7 個(gè)/ml。常溫下放置, 待測(cè)細(xì)胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個(gè)/ml的單細(xì)胞懸液備用。
     2. 勻漿器法：用眼科剪將組織剪成小塊；放入70ml組織研磨器內(nèi)，加入2mlF液及20%胎牛血清；緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)研棒，研磨勻漿；用5mlF液及20%胎牛血清沖洗研器；收集細(xì)胞懸液，經(jīng)200目不銹鋼濾網(wǎng)（另購(gòu)）過(guò)濾；
離心沉淀800rpm×2min ，再用細(xì)胞洗滌液洗3次，離心沉淀。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為（2～5）×10 7個(gè)/ml。常溫下放置, 待測(cè)細(xì)胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個(gè)/ml的單細(xì)胞懸液備用。
    3. 酶消化法：
     A．用F液將膠原酶稀釋，終濃度為400 U/ml，于冰浴備用。
     B．取一適當(dāng)大小培養(yǎng)皿進(jìn)行操作：用鑷子夾碎動(dòng)物脾臟，加入稀釋后的膠原酶，37℃消化20分鐘。
     C．以100或200目不銹鋼濾網(wǎng)（另購(gòu)）過(guò)濾，離心沉淀800prm×2min ，再用細(xì)胞洗滌液洗3次，離心沉淀。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為（2～5×10 7 個(gè)/ml。常溫下放置, 待測(cè)細(xì)胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個(gè)/ml的單細(xì)胞懸液備用。
 

細(xì)胞計(jì)數(shù)方法:
    細(xì)胞計(jì)數(shù)法是用來(lái)計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中細(xì)胞數(shù)量的一種方法。一般利用計(jì)數(shù)板（血球計(jì)數(shù)板）進(jìn)行。既可用于分離（散）細(xì)胞培養(yǎng)接種前計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，也可用于對(duì)培養(yǎng)物的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)。
    不論計(jì)數(shù)的對(duì)象如何，均須制備分散的細(xì)胞懸液。
    計(jì)數(shù)與計(jì)算過(guò)程
    1）在細(xì)胞計(jì)數(shù)板中央放置計(jì)數(shù)的蓋玻片。
    2）用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計(jì)數(shù)板凹蹧處流出懸液，蓋玻片被液體充滿為止。
    3）置顯微鏡下計(jì)數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)。對(duì)于壓線的細(xì)胞只計(jì)數(shù)在上線和左線者，對(duì)于細(xì)胞團(tuán)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)。
    4）按下式計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液的密度： 細(xì)胞密度＝（4個(gè)大格細(xì)胞總數(shù)/4）×10 4 個(gè)/ml×稀釋倍數(shù)公式中乘以10 4 因?yàn)橛?jì)數(shù)板中每一個(gè)大格的體積為：
1.0mm（長(zhǎng)）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm 3 而 1ml＝1000mm 3

細(xì)胞計(jì)數(shù)要點(diǎn)：
    A．進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于10 4 個(gè)/ml，如果細(xì)胞數(shù)目很少要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中；顯微鏡下計(jì)數(shù)時(shí)，遇到2個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞團(tuán)>10％，說(shuō)明細(xì)胞分散不充分; 或細(xì)胞數(shù)<200個(gè)/10mm 2 或>500個(gè)/10 mm 2 時(shí)，說(shuō)明稀釋不當(dāng)，需重新制備細(xì)胞懸液。
   B．要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好，否則影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。
   C． 取樣計(jì)數(shù)前， 應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液， 尤其是多次取樣計(jì)數(shù)時(shí)更要注意每次取樣都要混勻， 以求計(jì)數(shù)準(zhǔn)確；
   D．?dāng)?shù)細(xì)胞的原則是只數(shù)完整的細(xì)胞，若細(xì)胞聚集成團(tuán)時(shí)，只按照一個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞壓在格線上時(shí)，則只計(jì)上線，不計(jì)下線，只計(jì)左線，不計(jì)右線。
   E． 操作時(shí)，注意蓋玻片下不能有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中，否則要重新計(jì)數(shù)。
? 脾臟淋巴細(xì)胞分離方法
   1．取1ml脾臟細(xì)胞懸液（細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個(gè)/ml）小心疊加在C 液之液面上（比例為1：1），20℃±2℃，400g（約1500 轉(zhuǎn)/分），離心20 分鐘（半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子）。
   2. 此時(shí)離心管中由上下細(xì)胞分四層。*層;為稀釋液層。第二層；為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層；為透明分離液層。第四層；為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含細(xì)胞洗滌液4-5 毫升的試管中，充分混勻后，以500g（約1800 轉(zhuǎn)/分）離心20 分鐘。沉淀經(jīng)反復(fù)洗滌2 次即得所需淋巴細(xì)胞。
注： 提取率約為80%。

分離圖例：

三 、  注意事項(xiàng)
     A． 本分離液是敏光型的，在運(yùn)輸和貯藏過(guò)程中應(yīng)在18℃-25℃避光保存，啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外，本品為真空包裝，未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
     B． 待分離的骨髓要求新鮮，避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時(shí)分離效果好，且所有操作過(guò)程一定要在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
     C． 由于各品牌離心機(jī)的性能不同，國(guó)內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)，調(diào)節(jié)離心的時(shí)間，摸索佳的分離條件（具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定）。
     D． 好使用無(wú)靜電反應(yīng)的離心管，推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。

四 、 產(chǎn)品性能指標(biāo)

pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 ≤0.5EU/ml
無(wú)菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10µm 以上的不溶性微粒20 粒以下，
含25µm 以上的不溶性微粒5 粒以下

五 、 貯藏及保存期限
     18℃-25℃避光保存，有效期兩年。啟封后置4℃保存，有效期一周。
     注：若保證無(wú)微生物污染，啟封后可置4℃長(zhǎng)期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時(shí)本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

牛脾臟淋巴細(xì)胞分離液試劑盒訂購(gòu)說(shuō)明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運(yùn)輸說(shuō)明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。